OTULIN Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-436617

Panoramica

Otulin codifica OTULIN, una deubiquitinasi che idrolizza selettivamente le catene di ubiquitina legate tramite Met1 (lineari) generate dal complesso LUBAC, modellando così la propagazione dei segnali dipendenti dall’ubiquitina. Nelle cellule murine, OTULIN agisce come un importante regolatore negativo di NF-κB e della segnalazione infiammatoria controllando l’ubiquitinazione lineare di componenti della via quali RIPK1 e NEMO/IKBKG, influenzando le risposte citochiniche e le decisioni di morte cellulare. L’alterazione di OTULIN compromette la proteostasi e l’omeostasi immunitaria, collegando questa via a fenotipi autoinfiammatori e a meccanismi più ampi delle malattie infiammatorie. OTULIN interagisce inoltre con la segnalazione dell’immunità innata e con le risposte allo stress, in cui il rimodellamento delle catene lineari di ubiquitina regola l’ampiezza e la durata della segnalazione innescata dai recettori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OTULIN (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Otulin in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Otulin insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Otulin a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OTULIN.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Otulin per lo studio della segnalazione di OTULIN, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Otulin critici per la funzione di OTULIN
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Otulin per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OTULIN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal OTULIN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Otulin. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OTULIN Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR OTULIN (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Otulin per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Otulin definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.