OTULIN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-436617

Übersicht

Otulin kodiert OTULIN, eine Deubiquitinase, die selektiv Met1‑ (linear‑) verknüpfte Ubiquitinketten hydrolysiert, die durch den LUBAC‑Komplex erzeugt werden, und dadurch die ubiquitinabhängige Signalweiterleitung moduliert. In Mauszellen fungiert OTULIN als zentraler negativer Regulator von NF‑κB‑ und Entzündungssignalen, indem es die lineare Ubiquitinierung von Signalwegkomponenten wie RIPK1 und NEMO/IKBKG kontrolliert und so Zytokinantworten sowie Entscheidungen über Zelltod beeinflusst. Eine Störung von OTULIN bringt die Proteostase und die Immunhomöostase aus dem Gleichgewicht und verknüpft diesen Signalweg mit autoinflammatorischen Phänotypen und weiter gefassten Mechanismen entzündlicher Erkrankungen. OTULIN greift zudem in die angeborene Immunantwort und Stressreaktionen ein, wobei das Editing linearer Ubiquitinketten die Stärke und Dauer rezeptorinduzierter Signalgebung feinjustiert.

Das OTULIN CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Otulin-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Otulin-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Otulin nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die OTULIN-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Otulin-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der OTULIN-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Otulin-Exone abzielen, die für die OTULIN-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Otulin-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom OTULIN CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom OTULIN CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Otulin-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das OTULIN HDR-Plasmid (m) und OTULIN HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Otulin-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Otulin-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.