OTUD5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424913

Panoramica

Otud5 codifica OTUD5, una deubiquitinasi della famiglia dei tumori ovarici (OTU) che rimuove catene di ubiquitina dai substrati proteici per modularne la stabilità e l’output di segnalazione. L’attività di OTUD5 si interseca con il controllo ubiquitina-dipendente delle risposte al danno del DNA, della segnalazione dell’immunità innata e dei programmi trascrizionali regolati dallo stress, influenzando il modo in cui le cellule coordinano l’attivazione dei checkpoint e i segnali infiammatori. In modelli murini e sistemi cellulari, l’alterazione della deubiquitinazione associata a OTUD5 può modificare la proteostasi e il flusso delle vie di segnalazione in processi collegati a fenotipi rilevanti per il neurosviluppo e per il sistema immunitario. Queste caratteristiche rendono Otud5 un nodo utile per analizzare i meccanismi di editing dell’ubiquitina che regolano finemente la trasduzione del segnale e l’integrità del genoma.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OTUD5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Otud5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Otud5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Otud5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OTUD5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Otud5 per lo studio della segnalazione di OTUD5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Otud5 critici per la funzione di OTUD5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Otud5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OTUD5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal OTUD5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Otud5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OTUD5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR OTUD5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Otud5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Otud5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.