osteopontin/OPN/SPP1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-423134-LAC

Il gene murino **Spp1** codifica l’osteopontina (OPN/SPP1), una fosfoglicoproteina secreta che funge da regolatore matricellulare dell’adesione, della migrazione e della sopravvivenza cellulare attraverso il legame con le integrine e con CD44. La segnalazione di OPN interseca la dinamica delle adesioni focali, il rimodellamento del citoscheletro e vie chinasiche a valle, tra cui FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK, modulando il reclutamento delle cellule immunitarie e la polarizzazione infiammatoria. Nei contesti di rimodellamento tissutale, **Spp1** contribuisce all’organizzazione della matrice extracellulare, all’attività degli osteoclasti e a programmi miofibroblastici associati alla fibrosi. L’espressione deregolata di OPN è ampiamente utilizzata come indicatore molecolare e nodo meccanicistico in modelli di infiammazione cronica, interazioni tumore–stroma, malattie metaboliche e neuroinfiammazione.

Le particelle di attivazione lentivirale osteopontin/OPN/SPP1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Spp1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale osteopontin/OPN/SPP1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Spp1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di osteopontin/OPN/SPP1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Spp1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.