osteopontin/OPN/SPP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400219-NIC

SPP1 codifica l’osteopontina (OPN), una fosfoglicoproteina secreta che funge anche da citochina associata alla matrice extracellulare, regolando adesione, migrazione e sopravvivenza cellulare. OPN trasduce segnali tramite integrine (ad esempio αvβ3) e CD44 per modulare la dinamica delle adesioni focali, il rimodellamento del citoscheletro e vie a valle tra cui PI3K–AKT, MAPK/ERK e NF-κB. È espressa da molteplici tipi cellulari, incluse popolazioni immunitarie e stromali, e contribuisce alla segnalazione infiammatoria, alla polarizzazione dei macrofagi e ai programmi di rimodellamento tissutale. L’espressione deregolata di SPP1/OPN è spesso studiata nell’invasione e metastatizzazione tumorale, nella fibrosi e nelle condizioni infiammatorie croniche, dove rappresenta un nodo meccanicistico che collega segnali extracellulari a risposte trascrizionali pro-migratorie e pro-sopravvivenza.

osteopontin/OPN/SPP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SPP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SPP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SPP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SPP1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.