Plasmide Double Nickase (h) osteopontin/OPN/SPP1: sc-400219-NIC

SPP1 code l'ostéopontine (OPN), une phosphoglycoprotéine sécrétée qui agit aussi comme une cytokine associée à la matrice extracellulaire, régulant l'adhésion, la migration et la survie cellulaires. L'OPN transmet des signaux via les intégrines (par exemple αvβ3) et CD44 pour moduler la dynamique des adhésions focales, le remodelage du cytosquelette et des voies en aval, notamment PI3K–AKT, MAPK/ERK et NF-κB. Elle est exprimée par de nombreux types cellulaires, notamment des populations immunitaires et stromales, et contribue à la signalisation inflammatoire, à la polarisation des macrophages et aux programmes de remodelage tissulaire. Une expression dérégulée de SPP1/OPN est fréquemment étudiée dans l'invasion et la métastase tumorales, la fibrose et les affections inflammatoires chroniques, où elle constitue un nœud mécanistique reliant des signaux extracellulaires à des réponses transcriptionnelles pro-migratoires et pro-survie.

osteopontin/OPN/SPP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SPP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SPP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SPP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SPP1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.