OSC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421475

Panoramica

Lss codifica la ciclossigenasi dell’ossidosqualene (OSC), un enzima chiave associato al reticolo endoplasmatico che ciclizza il 2,3-ossidosqualene in lanosterolo, indirizzando in modo determinante il flusso metabolico verso il ramo degli steroli della via del mevalonato. Attraverso il controllo della biosintesi degli steroli, l’OSC influenza la composizione in colesterolo delle membrane, l’organizzazione dei lipid raft e, a valle, la capacità steroidogenica. L’alterazione del metabolismo degli steroli è ampiamente associata a una disregolazione dell’omeostasi lipidica e all’attivazione di programmi di stress cellulare, rendendo Lss un nodo utile per studiare il rimodellamento metabolico in contesti fisiologici e rilevanti per la malattia. Nei modelli murini, la perturbazione di Lss/OSC rappresenta un approccio gestibile per indagare come i vincoli della via degli steroli influenzino crescita cellulare, differenziamento e reti di segnalazione sensibili alla composizione lipidica di membrana.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OSC (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lss in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lss insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lss a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OSC.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lss per lo studio della segnalazione di OSC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lss critici per la funzione di OSC
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lss per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OSC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal OSC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lss. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OSC Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR OSC (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lss per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lss definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.