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Optineurin双切口酶质粒(m) | sc-427990-NIC | 20 µg | $410.00 |
Optn 编码 optineurin(视神经蛋白),这是一种多功能衔接蛋白,在小鼠细胞中参与选择性自噬、囊泡运输以及先天免疫信号传导。Optineurin 有助于协调依赖泛素的货物识别,并将 TBK1 信号与自噬体成熟过程连接起来,同时还能调节 NF-κB 通路活性和炎症反应。通过与细胞骨架及膜运输相关机制的相互作用,它在应激条件下促进高尔基体维持和内体动态调控。Optineurin 功能失调与神经炎症、蛋白稳态受损以及退行性相关表型有关,因此常被用作研究自噬与免疫信号机制的关键节点。
Optineurin 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Optn 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Optn内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Optn的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Optn基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。