OPN1SW Plasmide Double Nickase (h): sc-400755-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- OPN1SW Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il OPN1SW Double Nickase Plasmid (h) e il OPN1SW Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira OPN1SW. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
OPN1SW Plasmide Double Nickase (h) | sc-400755-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
OPN1SW Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400755-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
OPN1SW codifica l’opsina 1 sensibile alle lunghezze d’onda corte, un fotopigmento dei coni che lega l’11-cis-retinale per formare il pigmento visivo sensibile al blu nei segmenti esterni dei coni retinici. Dopo l’assorbimento di un fotone, OPN1SW attiva la cascata di fototrasduzione dei coni tramite la segnalazione mediata da transducina e fosfodiesterasi, riducendo il cGMP per modulare i canali regolati da nucleotidi ciclici e determinare l’iperpolarizzazione di membrana. Questa via interagisce con il traffico nel segmento esterno, la rigenerazione del cromoforo e i processi di adattamento alla luce, coordinati dal supporto dell’epitelio pigmentato retinico. Varianti genetiche o una disregolazione che compromettano la funzione di OPN1SW sono state associate a differenze nella sensibilità spettrale dei coni e possono contribuire a fenotipi della visione dei colori rilevanti per la ricerca sui disordini retinici ereditari.
OPN1SW Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus OPN1SW nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di OPN1SW. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di OPN1SW. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con OPN1SW interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.