Olfr1261 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-434614-LAC

Olfr1261 codifica un recettore olfattivo nel topo appartenente alla superfamiglia dei GPCR di classe A (tipo rodopsina) e si prevede che si accoppi alla segnalazione mediata da proteine G nei neuroni chemosensoriali. Nella via canonica di trasduzione olfattiva, l’attivazione del recettore per gli odoranti promuove la produzione di cAMP dipendente da Golf/ADCY3 e l’attività a valle dei canali regolati da nucleotidi ciclici, collegando il legame del recettore alla depolarizzazione neuronale e a programmi genici dipendenti dall’attività. Sebbene sia associata principalmente alla rilevazione degli odori, i membri della famiglia dei recettori olfattivi possono anche mostrare espressione ectopica in tessuti non olfattivi, dove la segnalazione GPCR può influenzare, in modo dipendente dal contesto, il metabolismo cellulare, la differenziazione o la segnalazione infiammatoria. Le alterazioni della segnalazione dei recettori olfattivi e dei pattern di espressione vengono spesso studiate come biomarcatori dello stato neuronale e in modelli di disfunzione sensoriale rilevanti per la neurodegenerazione e per studi sull’esposizione ambientale.

Le particelle di attivazione lentivirale Olfr1261 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Olfr1261 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Olfr1261 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Olfr1261, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Olfr1261. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Olfr1261 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.