Olfr1261 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-434614-ACT

Olfr1261 del topo codifica un recettore olfattivo appartenente alla famiglia dei GPCR di classe A tipo rodopsina, che in genere funziona come rilevatore chemosensoriale accoppiato alla segnalazione tramite proteine G, modulando le vie dipendenti dal cAMP e l’attività dei canali ionici a valle nei neuroni olfattivi. Sebbene i recettori olfattivi siano arricchiti nell’epitelio olfattivo, molti membri della famiglia mostrano espressione ectopica, consentendo studi sul traffico dei GPCR, sulla localizzazione di membrana e sulla trasduzione del segnale dipendente dallo stimolo in diversi contesti cellulari. La regolazione di Olfr1261 può chiarire meccanismi più ampi di scelta genica dei recettori sensoriali, differenziamento neuronale e controllo mediato dalla cromatina di grandi cluster di geni recettoriali. Una segnalazione GPCR deregolata e pattern alterati di espressione dei recettori chemosensoriali sono stati associati a cambiamenti in infiammazione, metabolismo e biologia tumorale, supportando ricerche esplorative su ruoli non canonici dei recettori olfattivi senza implicare esiti clinici.

Olfr1261 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Olfr1261 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Olfr1261 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Olfr1261 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Olfr1261, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Olfr1261. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Olfr1261 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Olfr1261 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Olfr1261 nelle cellule tumorali con espressione di Olfr1261 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.