OIP5 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-409486-LAC

OIP5 (Opa-interacting protein 5, noto anche come Mis18β) è un fattore conservato regolato dal ciclo cellulare che sostiene l’identità del centromero e la corretta segregazione dei cromosomi. Partecipa all’assemblaggio del centromero/cinetocore contribuendo al caricamento e al mantenimento di CENP-A, collegando la funzione di OIP5 alla progressione mitotica e alla stabilità del genoma. Un’espressione deregolata di OIP5 è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è spesso associata a firme proliferative, evidenziandone la rilevanza negli studi su instabilità cromosomica, aneuploidia e controllo della divisione cellulare. Di conseguenza, OIP5 è frequentemente studiato in vie che regolano la mitosi, le risposte allo stress da replicazione del DNA e i programmi di stato cellulare proliferativo.

Le particelle di attivazione lentivirale OIP5 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di OIP5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale OIP5 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione OIP5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di OIP5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo OIP5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.