Oct3/4 Plasmide Double Nickase (h): sc-410951-NIC

POU5F1B codifica un fattore di trascrizione umano con dominio POU correlato a Oct3/4, implicato nella regolazione dei programmi trascrizionali associati alla pluripotenza e dello stato della cromatina. L’attività della famiglia Oct3/4 si interfaccia con le reti centrali della “stemness” e con i circuiti trascrizionali che governano autorinnovamento, impegno di linea e riprogrammazione, con effetti a valle sul controllo del ciclo cellulare e sul rimodellamento epigenetico. Un’espressione aberrante o una disregolazione di POU5F1B è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è studiata in relazione a programmi trascrizionali oncogeni, plasticità cellulare e fenotipi di adattamento allo stress. Questo gene è quindi rilevante per analizzare i meccanismi degli stati “stem-like”, le barriere alla differenziazione e la biologia di malattia guidata da fattori di trascrizione in modelli cellulari umani.

Oct3/4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus POU5F1B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di POU5F1B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di POU5F1B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con POU5F1B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.