OATP-H Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404706

Panoramica

SLCO4C1 codifica per il polipeptide trasportatore di anioni organici umano OATP-H (OATP4C1), un trasportatore multispecifico della famiglia dei solute carrier che media l’assorbimento, indipendente dal sodio, di una gamma di metaboliti endogeni e di anioni organici di tipo xenobiotico attraverso le membrane cellulari. Questo trasportatore contribuisce ai processi di trasporto transmembrana che determinano l’esposizione cellulare ai composti circolanti e influenzano i successivi processi metabolici e le vie di detossificazione. Un’espressione o un’attività alterate dei membri della famiglia OATP sono state associate a variazioni nella distribuzione tissutale dei substrati e a perturbazioni dell’omeostasi metabolica, rendendo SLCO4C1 un bersaglio utile per lo studio di fenotipi guidati dal trasporto. Nella ricerca biomedica, la perturbazione di SLCO4C1 consente di indagare in modo meccanicistico le relazioni trasportatore–substrato e il loro impatto sulla segnalazione cellulare e sulle risposte allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OATP-H (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLCO4C1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLCO4C1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLCO4C1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OATP-H.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLCO4C1 per lo studio della segnalazione di OATP-H, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLCO4C1 critici per la funzione di OATP-H
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLCO4C1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OATP-H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal OATP-H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLCO4C1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OATP-H Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR OATP-H (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLCO4C1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLCO4C1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.