OAS1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402414-ACT

OAS1 umano (2′-5′-oligoadenilato sintetasi 1) è un enzima indotto dall’interferone che rileva l’RNA virale a doppio filamento e catalizza la sintesi di oligoadenilati con legami 2′-5′. Questi secondi messaggeri attivano RNasi L, promuovendo la degradazione dell’RNA virale e cellulare e modulando la segnalazione dell’immunità innata, incluso un feedback sulle vie dell’interferone di tipo I. L’attività di OAS1 influenza la restrizione antivirale, il tono infiammatorio e le risposte allo stress, e variazioni genetiche o di espressione sono state associate a differenze di suscettibilità e di esito nei contesti di infezione virale e in fenotipi immunitari guidati dall’interferone. In quanto nodo centrale dell’immunità basata sul sensing dell’RNA, OAS1 è ampiamente studiato per il suo impatto sulle interazioni ospite–patogeno e sui programmi trascrizionali regolati dalle citochine.

OAS1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di OAS1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

OAS1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus OAS1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione OAS1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di OAS1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus OAS1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da OAS1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via OAS1 nelle cellule tumorali con espressione di OAS1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.