Nurr1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400289-ACT

NR4A2 codifica il recettore nucleare orfano Nurr1, un fattore di trascrizione che regola programmi genici coinvolti nel controllo della differenziazione neuronale, dell’omeostasi mitocondriale e della segnalazione antinfiammatoria. Nurr1 è un determinante chiave dello sviluppo e del mantenimento dei neuroni dopaminergici, coordinando reti trascrizionali coinvolte nella sintesi della dopamina, nel trasporto vescicolare e nelle vie di risposta allo stress. Interagisce con la segnalazione dei recettori nucleari e con processi di regolazione della cromatina per modulare il destino e la sopravvivenza cellulare in condizioni di stress infiammatorio o ossidativo. Un’attività deregolata di NR4A2/Nurr1 è stata associata a neurodegenerazione e ad alterata attivazione immunitaria, rendendolo rilevante per studi meccanicistici delle vie correlate alla malattia di Parkinson e dei fenotipi neuroinfiammatori.

Nurr1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NR4A2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nurr1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NR4A2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NR4A2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nurr1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NR4A2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nurr1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nurr1 nelle cellule tumorali con espressione di NR4A2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.