Nup50 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406550

Übersicht

NUP50 kodiert Nup50, eine dynamische Komponente des Kernporenkomplexes, die am nukleozytoplasmatischen Transport beteiligt ist, indem sie den importin-α/β-abhängigen Transport von Frachtproteinen sowie deren Recycling im Zellkern moduliert. Über seine Interaktionen am nukleären Korb trägt Nup50 dazu bei, die Kinetik des Kernimports mit übergeordneten Prozessen wie Zellzyklusprogression, transkriptioneller Regulation und der Aufrechterhaltung der Kernarchitektur zu koordinieren. Störungen von Kerntransportwegen und der Homöostase des Kernporenkomplexes werden häufig mit Genominstabilität und veränderten Signalprogrammen in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und andere Erkrankungen relevant sind, die durch eine beeinträchtigte nukleozytoplasmatische Kompartimentierung gekennzeichnet sind. Entsprechend wird NUP50 häufig im Zusammenhang mit der Regulation des Kerntransports, Proteostase und stressresponsiver Signalübertragung untersucht.

Das Nup50 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NUP50-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NUP50-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NUP50 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Nup50-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NUP50-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Nup50-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NUP50-Exone abzielen, die für die Nup50-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NUP50-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Nup50 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Nup50 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NUP50-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Nup50 HDR-Plasmid (h) und Nup50 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NUP50-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NUP50-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.