Nup50 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406550

Panoramica

NUP50 codifica Nup50, un componente dinamico del complesso del poro nucleare che partecipa al trasporto nucleo-citoplasmatico modulando il traffico e il riciclo, all’interno del nucleo, dei carichi dipendenti da importina-α/β. Attraverso le sue interazioni a livello del cestello nucleare, Nup50 contribuisce a coordinare la cinetica dell’importazione nucleare con processi più ampi quali la progressione del ciclo cellulare, la regolazione trascrizionale e il mantenimento dell’architettura nucleare. L’alterazione delle vie di trasporto nucleare e dell’omeostasi del complesso del poro nucleare è spesso implicata nell’instabilità genomica e in programmi di segnalazione modificati rilevanti per la biologia del cancro e per altri disturbi caratterizzati da una compartimentalizzazione nucleo-citoplasmatica compromessa. Di conseguenza, NUP50 è comunemente studiato nel contesto della regolazione del trasporto nucleare, della proteostasi e della segnalazione responsiva allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nup50 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NUP50 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NUP50 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NUP50 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nup50.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NUP50 per lo studio della segnalazione di Nup50, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NUP50 critici per la funzione di Nup50
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NUP50 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nup50 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Nup50 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NUP50. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nup50 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Nup50 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NUP50 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NUP50 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.