Nup205 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404728-ACT

Il gene umano **NUP205** codifica **Nup205**, un componente strutturale essenziale (scaffold) del complesso del poro nucleare, che contribuisce all’integrità dell’involucro nucleare e al trasporto nucleocitoplasmatico selettivo. Nup205 sostiene l’assemblaggio e la stabilità dell’architettura del poro e influenza molteplici processi legati a una regolazione dipendente dal trasporto, tra cui l’esportazione dell’RNA, l’importazione di proteine e il rimodellamento nucleare associato al ciclo cellulare. Modellando l’efficienza e la selettività del passaggio dei carichi, Nup205 può influenzare programmi trascrizionali e risposte allo stress che dipendono da un accesso nucleare regolato. La deregolazione dei componenti del poro nucleare, incluse le vie associate a Nup205, è rilevante negli studi sul controllo della proliferazione e sui fenotipi cellulari osservati in contesti oncologici e neuroevolutivi o neurodegenerativi.

Nup205 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NUP205 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nup205 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NUP205 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NUP205, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nup205. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NUP205 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nup205 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nup205 nelle cellule tumorali con espressione di NUP205 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.