Nup107 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405252-ACT

NUP107 codifica Nup107, un componente centrale del sottocomplesso Nup107–160 del complesso del poro nucleare, che supporta il trasporto nucleo–citoplasmatico di proteine e RNA. Oltre a regolare il trasporto, Nup107 contribuisce all’organizzazione dell’involucro nucleare, alla progressione mitotica e all’assemblaggio del fuso, collegando il traffico nucleocitoplasmatico al controllo del ciclo cellulare e ai percorsi di stabilità del genoma. L’alterazione dell’architettura del poro nucleare e della selettività di trasporto può rimodellare i programmi trascrizionali e le risposte allo stress, rendendo NUP107 un nodo utile per studiare la regolazione dipendente dal trasporto nucleare. Un’alterata funzione delle nucleoporine è stata associata a fenotipi dello sviluppo e a stati cellulari correlati al cancro, offrendo una rilevanza meccanicistica per la ricerca biomedica incentrata su proliferazione e omeostasi nucleare.

Nup107 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NUP107 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nup107 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NUP107 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NUP107, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nup107. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NUP107 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nup107 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nup107 nelle cellule tumorali con espressione di NUP107 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.