Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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NUB1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424677
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NUB1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico NUB1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NUB1 Antibody (F-10): sc-377003
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NUB1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-424677 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Nub1 (NEDD8 ultimate buster 1) codifica NUB1, una proteina inducibile dall’interferone che si lega al modificatore ubiquitina-simile NEDD8 e promuove l’eliminazione, dipendente dal proteasoma, dei substrati coniugati a NEDD8. Regolando la dinamica della neddilazione e il turnover delle proteine collegate alle ligasi E3 cullin-RING, NUB1 influenza l’omeostasi del sistema ubiquitina–proteasoma, la progressione del ciclo cellulare e le risposte cellulari allo stress. NUB1 interagisce anche con proteine ubiquitina-simili come FAT10, collegando la segnalazione dell’immunità innata alla degradazione proteica regolata. La disregolazione di queste vie è spesso implicata in squilibri della proteostasi e in fenotipi di segnalazione infiammatoria, rendendo Nub1 un nodo utile per studi meccanicistici in modelli murini.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NUB1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nub1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nub1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nub1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NUB1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nub1 per lo studio della segnalazione di NUB1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Nub1 critici per la funzione di NUB1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nub1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal NUB1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NUB1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nub1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal NUB1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NUB1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nub1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nub1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.