Particules Lentivirales d'Activation (h) NT-3: sc-401458-LAC

La neurotrophine 3 (NTF3) code NT-3, un facteur neurotrophique sécrété essentiel à la survie des neurones, à leur différenciation et à la maturation synaptique au cours du développement, ainsi qu’au maintien des tissus chez l’adulte. NT-3 transmet ses signaux principalement via le récepteur tyrosine kinase TRKC/NTRK3, en activant les cascades MAPK/ERK, PI3K–AKT et PLCγ afin de réguler la croissance des neurites, la neurotransmission et la plasticité dépendante de l’activité. Au-delà du système nerveux, NT-3 influence les interactions entre les neurones sensoriels et leurs cibles et peut moduler les réponses des cellules gliales et des tissus périphériques via les réseaux de signalisation des récepteurs aux neurotrophines. Une dérégulation de l’activité de la voie NTF3/NT-3 a été impliquée dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, et fait l’objet de nombreuses études dans le contexte d’altérations de la signalisation médiée par NTRK, pertinentes pour les troubles du système nerveux.

Les particules d'activation lentivirales NT-3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NTF3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NT-3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NTF3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NT-3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NTF3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.