NRSF Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-418578-LAC

Il fattore di trascrizione silenziante RE1 (REST), noto anche come fattore silenziatore restrittivo neuronale (NRSF), è un repressore trascrizionale sequenza-specifico che si lega agli elementi RE1/NRSE per limitare i programmi genici neuronali nelle cellule non neuronali e modellare la maturazione e la plasticità neuronale. REST coordina il rimodellamento della cromatina reclutando complessi co-repressori come CoREST, le HDAC e le metiltransferasi degli istoni, influenzando così lo stato epigenetico, la segnalazione sinaptica e le reti trascrizionali dipendenti dall’attività. Attraverso queste funzioni, REST integra segnali di sviluppo e risposte allo stress che influenzano le decisioni sul destino cellulare, l’eccitabilità e le traiettorie di differenziamento. Un’attività di REST/NRSF deregolata è stata implicata in processi di neurosviluppo e neurodegenerazione, nonché in un riassetto trascrizionale oncogenico, rendendolo un nodo chiave per studi meccanicistici della regolazione genica.

Le particelle di attivazione lentivirale NRSF (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di REST in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale NRSF (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione REST, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di NRSF. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo REST e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.