NRSF Plasmide Double Nickase (h): sc-418578-NIC

REST, noto anche come neuron-restrictive silencer factor (NRSF), è un repressore trascrizionale a dita di zinco che si lega ai siti repressor element-1 (RE1/NRSE) per silenziare i programmi genici neuronali nelle cellule non neuronali e modulare la maturazione dei neuroni. Attraverso il reclutamento di complessi corepressori come SIN3/HDAC e CoREST/LSD1, REST rimodella la cromatina per regolare geni sinaptici, canali ionici e vie neurosecretorie, influenzando differenziamento, eccitabilità e risposte allo stress. Il controllo trascrizionale dipendente da REST si intreccia con la regolazione epigenetica e con la segnalazione dipendente dall’attività, contribuendo a cambiamenti specifici del contesto nell’identità cellulare e nella plasticità. Un’attività deregolata di REST/NRSF è stata associata a meccanismi neuroevolutivi e neurodegenerativi, nonché a programmi aberranti di repressione trascrizionale osservati in molteplici contesti tumorali, sostenendone l’utilizzo come nodo per lo studio delle reti di regolazione genica.

NRSF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus REST nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di REST. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di REST. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con REST interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.