NR3B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406162

Panoramica

GRIN3B codifica la subunità NR3B dei recettori N-metil-D-aspartato (NMDA), una classe di recettori ionotropici del glutammato che regolano la trasmissione sinaptica eccitatoria e la segnalazione dipendente da Ca²⁺ nel sistema nervoso centrale. L’incorporazione di subunità della famiglia NR3 può modificare la biofisica del recettore, inclusa la sensibilità agli agonisti e le proprietà del canale, modulando così la plasticità sinaptica e la regolazione genica dipendente dall’attività. La modulazione della segnalazione glutamatergica mediata da GRIN3B interseca vie che controllano lo sviluppo neuronale, il perfezionamento dei circuiti e l’omeostasi del calcio. Una funzione deregolata dei recettori NMDA è rilevante per studi su fenotipi neurosviluppativi e neuropsichiatrici, risposte allo stress eccitotossico e meccanismi di alterata connettività sinaptica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NR3B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GRIN3B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GRIN3B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GRIN3B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NR3B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GRIN3B per lo studio della segnalazione di NR3B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GRIN3B critici per la funzione di NR3B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GRIN3B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NR3B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NR3B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GRIN3B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NR3B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NR3B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GRIN3B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GRIN3B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.