NR3A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403378

Panoramica

GRIN3A codifica la subunità umana NR3A dei recettori N-metil-D-aspartato (NMDA), un complesso di canali ionici attivato dal glutammato che modella la trasmissione sinaptica e l’eccitabilità neuronale. L’incorporazione di NR3A nei recettori NMDA ne altera le proprietà del canale, inclusa una ridotta permeabilità al Ca2+ e una modifica del blocco da Mg2+, influenzando così il rimodellamento sinaptico e la plasticità dipendenti dall’attività. L’espressione di GRIN3A è regolata durante lo sviluppo ed è implicata in processi quali l’equilibrio eccitatorio/inibitorio, la maturazione dendritica e il perfezionamento dei circuiti. Una composizione deregolata delle subunità dei recettori NMDA, inclusi livelli alterati di NR3A, è stata associata a fenotipi neurosviluppativi e neuropsichiatrici, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici della segnalazione sinaptica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NR3A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GRIN3A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GRIN3A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GRIN3A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NR3A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GRIN3A per lo studio della segnalazione di NR3A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GRIN3A critici per la funzione di NR3A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GRIN3A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NR3A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NR3A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GRIN3A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NR3A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NR3A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GRIN3A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GRIN3A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.