NQO1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400326-LAC

NQO1 (NAD(P)H chinone deidrogenasi 1) è una flavoproteina citosolica che catalizza la riduzione a due elettroni dei chinoni a idrochinoni, limitando il redox cycling e la generazione di specie reattive dell’ossigeno. In quanto enzima di detossificazione canonico regolato dall’asse NRF2/KEAP1, NQO1 sostiene l’omeostasi redox cellulare e si intreccia con il metabolismo degli xenobiotici, le risposte allo stress ossidativo e la proteostasi tramite la stabilizzazione di proteine selezionate. Alterazioni dell’espressione e dell’attività di NQO1 sono state collegate a variazioni nella suscettibilità al danno ossidativo e a una biologia tumorale dipendente dal contesto, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulla carcinogenesi e sull’adattamento allo stress. NQO1 è inoltre spesso utilizzato come readout dell’attivazione di via nella segnalazione mediata dall’Antioxidant Response Element (ARE) e nei programmi trascrizionali indotti da elettrofili.

Le particelle di attivazione lentivirale NQO1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NQO1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale NQO1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NQO1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di NQO1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NQO1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.