NPM3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421944

Panoramica

Il gene murino **Npm3** codifica la nucleofosmina/nucleoplasmina 3 (NPM3), una proteina nucleolare implicata nella biogenesi dei ribosomi e nell’omeostasi del nucleolo attraverso la regolazione del processamento dell’rRNA e dell’assemblaggio delle ribonucleoproteine. NPM3 partecipa a processi associati alla cromatina e alle dinamiche nucleo-citoplasmatiche interagendo con altri fattori nucleolari, collegando la funzione del nucleolo alla progressione del ciclo cellulare e alle risposte allo stress. L’alterazione delle proteine nucleolari in questa via può influenzare il controllo della proliferazione, la stabilità genomica e programmi trascrizionali rilevanti per la trasformazione oncogena e per la biologia delle neoplasie ematologiche. In quanto componente di impalcatura del nucleolo, NPM3 rappresenta un utile punto di partenza per analizzare come l’integrità nucleolare moduli i segnali di crescita e l’adattamento cellulare allo stress proteotossico o genotossico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NPM3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Npm3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Npm3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Npm3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NPM3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Npm3 per lo studio della segnalazione di NPM3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Npm3 critici per la funzione di NPM3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Npm3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NPM3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NPM3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Npm3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NPM3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NPM3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Npm3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Npm3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.