Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
NPC1L1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401741
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NPC1L1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico NPC1L1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NPC1L1 Antibody (G-1): sc-166802
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NPC1L1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401741 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
NPC1L1 (Niemann-Pick C1-like 1) è una proteina di membrana multipasso che media l’assorbimento cellulare del colesterolo alimentare e biliare e di altri steroli, agendo a livello della membrana plasmatica e all’interno di compartimenti del traffico endocitico. Partecipa ai processi di rilevamento degli steroli e di trasporto vescicolare che influenzano l’omeostasi lipidica intracellulare e la gestione delle lipoproteine. L’attività di NPC1L1 si interseca con le vie che controllano l’assorbimento del colesterolo, la composizione delle membrane e la segnalazione dipendente dai lipidi. La disregolazione del trasporto di steroli associato a NPC1L1 è rilevante per fenotipi metabolici legati a un equilibrio del colesterolo alterato e a stati infiammatori guidati dai lipidi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NPC1L1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NPC1L1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NPC1L1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NPC1L1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NPC1L1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NPC1L1 per lo studio della segnalazione di NPC1L1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni NPC1L1 critici per la funzione di NPC1L1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NPC1L1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal NPC1L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NPC1L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NPC1L1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal NPC1L1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NPC1L1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NPC1L1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NPC1L1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.