Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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NOXA Plasmide Double Nickase (h): sc-400498-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NOXA Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NOXA Double Nickase Plasmid (h) e il NOXA Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PMAIP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NOXA Antibody (F-3): sc-515840
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NOXA Plasmide Double Nickase (h) | sc-400498-NIC | 20 µg | $410.00 |
PMAIP1 codifica la proteina BH3-only NOXA, un regolatore pro-apoptotico responsivo a p53 che promuove la permeabilizzazione della membrana mitocondriale esterna neutralizzando i membri anti-apoptotici della famiglia BCL2, con una marcata selettività per MCL1 e BCL2A1. NOXA integra i segnali di danno al DNA e di stress oncogenico per attivare la via intrinseca dell’apoptosi, influenzando l’attivazione delle caspasi, la fitness cellulare e le decisioni sul destino cellulare indotte dallo stress. La sua espressione e il suo turnover sono ulteriormente modulati dalla proteostasi mediata dall’ubiquitina e da programmi trascrizionali a valle di p53 e di vie di stress correlate. La disregolazione dell’asse PMAIP1–NOXA è spesso studiata in contesti di alterata sensibilità all’apoptosi, inclusi la biologia del cancro e i meccanismi di resistenza all’apoptosi mitocondriale.
NOXA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PMAIP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PMAIP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PMAIP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PMAIP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.