NOP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409656-ACT

O NOP2 humano codifica uma metiltransferase de RNA nucleolar implicada na biogênese de ribossomos por meio da modificação e maturação do rRNA, sustentando a montagem da subunidade ribossômica grande e a síntese proteica eficiente. A atividade de NOP2 está intimamente ligada à função nucleolar, à progressão do ciclo celular e a programas de crescimento proliferativo, refletindo seu papel em coordenar a capacidade traducional com a demanda celular. Expressão desregulada de NOP2 e assinaturas de estresse nucleolar foram relatadas em múltiplos contextos tumorais, nos quais a produção alterada de ribossomos e o controle da tradução contribuem para fenótipos oncogênicos. Como resultado, o NOP2 é frequentemente estudado em vias que conectam o processamento de rRNA, a regulação transcricional associada à cromatina e a proteostase.

NOP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NOP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NOP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NOP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NOP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NOP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NOP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NOP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NOP2 em células tumorais com expressão de NOP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.