Nogo-R Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403012-ACT

RTN4R codifica il recettore 1 di Nogo (Nogo-R), un recettore neuronale di superficie ancorato tramite glicosilfosfatidilinositolo (GPI) che si lega a inibitori associati alla mielina quali RTN4/Nogo, MAG e OMGP. Il legame con il ligando promuove la segnalazione RhoA–ROCK e il rimodellamento del citoscheletro, limitando l’estensione dei neuriti e regolando la guida assonale, la plasticità sinaptica e la stabilità dei circuiti neurali. Nogo-R interagisce anche con co-recettori tra cui LINGO1 e p75NTR/TNFRSF19 per modulare la dinamica del cono di crescita e i segnali extracellulari inibitori. Una deregolazione della segnalazione di RTN4R è stata implicata in contesti di ricerca neuroevolutiva e neurodegenerativa, a supporto di studi su rigenerazione assonale, connettività e vie inibitorie associate alla mielina.

Nogo-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RTN4R senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nogo-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RTN4R nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RTN4R, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nogo-R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RTN4R nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nogo-R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nogo-R nelle cellule tumorali con espressione di RTN4R silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.