NOD2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400668-ACT

NOD2 umano (proteina 2 contenente un dominio di oligomerizzazione legante nucleotidi) è un recettore citosolico di riconoscimento di pattern che rileva frammenti di peptidoglicano batterico, come il muramil dipeptide, e avvia la segnalazione dell’immunità innata. Una volta attivato, NOD2 recluta RIPK2 per stimolare le vie di NF-κB e delle MAPK, modulando l’espressione genica infiammatoria, le risposte antimicrobiche e l’omeostasi della barriera epiteliale. NOD2 interagisce inoltre con processi legati all’autofagia e al rilevamento microbico nelle cellule mieloidi e nelle cellule epiteliali intestinali. Alterazioni genetiche e funzionali della segnalazione di NOD2 sono associate a una disregolazione delle interazioni ospite–microbiota e a fenotipi infiammatori, a supporto del suo studio nell’immunità mucosale e in modelli di infiammazione associata alle infezioni.

NOD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NOD2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NOD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NOD2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NOD2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NOD2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NOD2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NOD2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NOD2 nelle cellule tumorali con espressione di NOD2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.