NOD1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430738

Panoramica

Il gene murino Nod1 codifica NOD1, un recettore citosolico di tipo NOD-like che riconosce specifici motivi di peptidoglicano contenenti acido diaminopimelico provenienti da batteri Gram-negativi e avvia la segnalazione dell’immunità innata. In seguito al riconoscimento del ligando, NOD1 recluta RIPK2 per attivare le vie di NF-κB e MAPK, promuovendo l’espressione di geni infiammatori, risposte antimicrobiche e il crosstalk con i programmi di autofagia e di barriera epiteliale. L’attività di NOD1 modella le interazioni ospite–microbioma e influenza la produzione di citochine, rendendolo rilevante nei modelli sperimentali di infiammazione mucosale, biologia delle infezioni e danno tissutale mediato dal sistema immunitario. Una segnalazione di NOD1 disregolata è stata implicata nella fisiopatologia infiammatoria e nell’infiammazione metabolica, supportandone l’uso come nodo genetico per interrogare i circuiti dell’immunità innata.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NOD1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nod1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nod1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nod1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NOD1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nod1 per lo studio della segnalazione di NOD1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nod1 critici per la funzione di NOD1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nod1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NOD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NOD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nod1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NOD1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NOD1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nod1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nod1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.