NMNAT-3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403839-LAC

Il gene umano **NMNAT3** codifica la nicotinamide mononucleotide adenylyltransferase-3 (NMNAT-3), un enzima mitocondriale che catalizza la conversione di NMN e ATP in NAD+, sostenendo l’equilibrio redox dell’organello e il metabolismo dipendente dal NAD+. Mantenendo il pool mitocondriale di NAD, NMNAT-3 influenza la fosforilazione ossidativa, la gestione delle specie reattive dell’ossigeno e i processi di controllo di qualità mitocondriale collegati alle risposte cellulari allo stress. L’attività di NMNAT3 è funzionalmente connessa a vie più ampie di biosintesi e di recupero (salvage) del NAD, che intersecano la segnalazione delle sirtuine e le risposte al danno del DNA mediate da PARP attraverso la disponibilità di NAD+. La disregolazione dell’omeostasi del NAD mitocondriale è rilevante per la ricerca su neurodegenerazione, disfunzioni metaboliche e meccanismi delle malattie mitocondriali, in cui bioenergetica alterata e resilienza allo stress rappresentano fenotipi chiave.

Le particelle di attivazione lentivirale NMNAT-3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NMNAT3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale NMNAT-3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NMNAT3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di NMNAT-3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NMNAT3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.