NMNAT-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403839

Panoramica

NMNAT3 codifica la nicotinammide mononucleotide adeniniltransferasi 3 (NMNAT-3), un enzima mitocondriale che catalizza la fase finale della biosintesi del NAD+ a partire dal nicotinammide mononucleotide, mantenendo i pool di NAD+ dell’organello necessari per il metabolismo ossidativo. Controllando le reazioni redox dipendenti dal NAD+ e supportando la segnalazione legata a sirtuine e PARP, NMNAT-3 influenza l’omeostasi mitocondriale, le risposte cellulari allo stress e l’equilibrio energetico. Un’attività alterata di NMNAT3 è stata associata a una deregolazione del metabolismo del NAD+ e a disfunzione mitocondriale, processi implicati nella neurodegenerazione, nei disturbi cardiometabolici e nell’adattamento metabolico delle cellule tumorali. In quanto nodo mitocondriale del NAD+, NMNAT-3 è rilevante per studi su bioenergetica, mantenimento mitocondriale e vie di segnalazione accoppiate al NAD+.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NMNAT-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NMNAT3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NMNAT3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NMNAT3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NMNAT-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NMNAT3 per lo studio della segnalazione di NMNAT-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NMNAT3 critici per la funzione di NMNAT-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NMNAT3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NMNAT-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NMNAT-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NMNAT3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NMNAT-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NMNAT-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NMNAT3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NMNAT3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.