NMDAε4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420692

Panoramica

Grin2d codifica la subunità del recettore NMDA murino NMDAε4 (GluN2D), un componente di un canale ionico attivato dal glutammato che modella la trasmissione sinaptica eccitatoria attraverso un ingresso di Ca²⁺ dipendente dal voltaggio e dal ligando. L’incorporazione di NMDAε4 influenza la cinetica del recettore e la sensibilità al Mg²⁺, modulando così la plasticità sinaptica, l’espressione genica dipendente dall’attività e lo sviluppo delle reti neuronali. La segnalazione dei recettori NMDA interagisce con CaMK/CREB e con altre vie calcio-dipendenti che collegano l’attività sinaptica a programmi trascrizionali e alla maturazione dei circuiti. Un’alterata funzione di NMDAε4 o una diversa composizione delle subunità viene spesso studiata nel contesto di fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, nonché della suscettibilità alle crisi e di paradigmi di stress eccitotossico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NMDAε4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Grin2d in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Grin2d insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Grin2d a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NMDAε4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Grin2d per lo studio della segnalazione di NMDAε4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Grin2d critici per la funzione di NMDAε4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Grin2d per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NMDAε4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NMDAε4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Grin2d. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NMDAε4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NMDAε4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Grin2d per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Grin2d definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.