nm23-H2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416164

Panoramica

NME1-NME2 codifica nm23-H2, una nucleoside difosfato chinasi che contribuisce a mantenere l’omeostasi dei nucleotidi cellulari catalizzando il trasferimento di fosfato tra NTP e NDP. Oltre al suo ruolo metabolico, nm23-H2 partecipa alla regolazione dell’espressione genica e di reti di segnalazione collegate a proliferazione, differenziamento e risposte allo stress, con funzioni riportate nel legame agli acidi nucleici e nel controllo trascrizionale nel nucleo. Alterazioni dell’attività e dei pattern di espressione di NME1/NME2 sono state associate alla progressione tumorale e al comportamento metastatico in molteplici contesti oncologici, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici su invasione e transizioni di stato cellulare. Nelle cellule umane, nm23-H2 è anche studiata in relazione al rimodellamento del citoscheletro e alle vie della motilità che influenzano i fenotipi migratori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO nm23-H2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NME1-NME2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NME1-NME2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NME1-NME2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina nm23-H2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NME1-NME2 per lo studio della segnalazione di nm23-H2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NME1-NME2 critici per la funzione di nm23-H2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NME1-NME2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal nm23-H2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal nm23-H2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NME1-NME2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal nm23-H2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR nm23-H2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NME1-NME2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NME1-NME2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.