Plasmide CRISPR/Cas9 KO NLP (h): sc-406794

Présentation

NINL code pour la protéine ninein-like (NLP), un facteur associé au centrosome et aux microtubules qui soutient l’organisation centrosomale, l’ancrage des microtubules et la dynamique du cytosquelette nécessaires au trafic intracellulaire et à la division cellulaire. NLP est liée à la maturation du centrosome ainsi qu’aux processus de nucléation et d’organisation des microtubules, qui façonnent la formation du fuseau et maintiennent la stabilité du génome durant la mitose. Les perturbations de la régulation du centrosome et du fuseau sont pertinentes dans les troubles prolifératifs et les phénotypes d’instabilité chromosomique, ce qui fait de NINL une cible utile pour disséquer les voies couplant la fonction du centrosome à la progression du cycle cellulaire. Dans les cellules humaines, les études sur NINL éclairent également les mécanismes du transport dépendant des microtubules et l’organisation spatiale des organites.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NLP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NINL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NINL, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NINL à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NLP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NINL pour l'étude de la signalisation de NLP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NINL essentiels à la fonction de NLP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NINL pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NLP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NLP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NINL. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NLP plasmide HDR (h) et le NLP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NINL pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NINL définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.