NLP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406794

Panoramica

NINL codifica la proteina ninein-like (NLP), un fattore associato al centrosoma e ai microtubuli che supporta l’organizzazione del centrosoma, l’ancoraggio dei microtubuli e la dinamica del citoscheletro necessarie per il traffico intracellulare e la divisione cellulare. NLP è collegata alla maturazione del centrosoma e ai processi di nucleazione/organizzazione dei microtubuli che modellano la formazione del fuso e mantengono la stabilità del genoma durante la mitosi. L’alterazione della regolazione del centrosoma e del fuso è rilevante per i disturbi proliferativi e i fenotipi di instabilità cromosomica, rendendo NINL un bersaglio utile per analizzare le vie che collegano la funzione del centrosoma alla progressione del ciclo cellulare. Nelle cellule umane, gli studi su NINL chiariscono anche i meccanismi del trasporto dipendente dai microtubuli e dell’organizzazione spaziale degli organelli.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NLP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NINL in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NINL insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NINL a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NLP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NINL per lo studio della segnalazione di NLP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NINL critici per la funzione di NLP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NINL per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NLP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NLP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NINL. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NLP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NLP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NINL per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NINL definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.