Nkx-3.2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406906

Panoramica

NKX3-2 codifica il fattore di trascrizione homeobox Nkx-3.2, una proteina nucleare legante il DNA che regola programmi di espressione genica dello sviluppo, in particolare quelli che controllano la condrogenesi e la definizione del pattern dello scheletro assiale. Nkx-3.2 modula la specificazione di linea e la differenziazione coordinando reti trascrizionali a valle della segnalazione di morfogeni, incluse vie associate a segnali della famiglia BMP e TGF-β. Un’alterata attività di NKX3-2 è stata associata a difetti nello sviluppo della cartilagine e dello scheletro ed è spesso studiata nel contesto delle displasie scheletriche congenite e dei meccanismi di patterning craniofacciale. Nei sistemi cellulari, NKX3-2 rappresenta un nodo sperimentalmente gestibile per analizzare il controllo trascrizionale della differenziazione mesenchimale e la regolazione dei geni della matrice extracellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nkx-3.2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NKX3-2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NKX3-2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NKX3-2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nkx-3.2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NKX3-2 per lo studio della segnalazione di Nkx-3.2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NKX3-2 critici per la funzione di Nkx-3.2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NKX3-2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nkx-3.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Nkx-3.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NKX3-2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nkx-3.2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Nkx-3.2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NKX3-2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NKX3-2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.