Nix Plasmide Double Nickase (h): sc-401982-NIC

BNIP3L codifica Nix, una proteina BH3-only della membrana esterna mitocondriale che integra i segnali di ipossia e di stress cellulare con il turnover mitocondriale programmato. Nix promuove l’autofagia selettiva dei mitocondri tramite regioni di interazione con LC3 e coopera con programmi di mitofagia indipendenti da PINK1/Parkin, sostenendo il controllo qualità mitocondriale durante la differenziazione e l’adattamento allo stress. Attraverso la regolazione del potenziale di membrana mitocondriale, dell’omeostasi delle ROS e delle interazioni con la famiglia BCL2, Nix influenza l’apoptosi intrinseca e il rimodellamento metabolico. Un’attività deregolata di BNIP3L/Nix è stata associata ad alterazioni della mitofagia e delle decisioni sul destino cellulare in contesti quali neurodegenerazione, stress cardiometabolico e biologia del cancro, rendendolo un nodo utile per lo studio delle vie di sorveglianza mitocondriale.

Nix Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BNIP3L nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BNIP3L. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BNIP3L. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BNIP3L interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.