Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403321-ACT

CHRNG codifica la subunità gamma del recettore nicotinico dell’acetilcolina (nAChR), un canale ionico attivato da ligando che media il flusso di cationi dipendente dall’acetilcolina e la depolarizzazione di membrana nel muscolo scheletrico in sviluppo. Il recettore contenente la subunità gamma è un segno distintivo del muscolo fetale/denervato e viene sostituito dalla subunità epsilon nelle giunzioni neuromuscolari mature, collegando CHRNG alla sinaptogenesi dello sviluppo e al passaggio tra subunità recettoriali. Partecipando alla segnalazione colinergica e a programmi di differenziamento muscolare dipendenti dall’attività, CHRNG influenza la trasmissione neuromuscolare e l’eccitabilità. Varianti patogene di CHRNG sono state associate a fenotipi miastenici congeniti e a sindromi legate all’acinesia fetale, rendendolo rilevante per studi sullo sviluppo neuromuscolare e sui meccanismi di malattia.

Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CHRNG senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CHRNG nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CHRNG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CHRNG nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG nelle cellule tumorali con espressione di CHRNG silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.