Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418958

Panoramica

Chrnb2 codifica la subunità β2 dei recettori nicotinici neuronali dell’acetilcolina (nAChR), un canale cationico pentamerico attivato da ligando che media la neurotrasmissione colinergica rapida. Gli nAChR contenenti β2 regolano la depolarizzazione di membrana e l’ingresso di Ca²⁺, modulando la plasticità sinaptica, il rilascio di neurotrasmettitori e l’eccitabilità dei circuiti in vie associate ad attenzione, ricompensa e arousal. Attraverso questi eventi di segnalazione ionotropica, CHRNB2 influenza l’espressione genica dipendente dall’attività e i processi a valle associati a MAPK/CREB. Alterazioni genetiche e funzionali degli nAChR contenenti β2 sono state associate a fenotipi neurocomportamentali e a meccanismi legati alle crisi epilettiche, rendendo Chrnb2 un bersaglio rilevante per modellare il contributo colinergico alla biologia delle malattie neurologiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Chrnb2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Chrnb2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Chrnb2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Chrnb2 per lo studio della segnalazione di Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Chrnb2 critici per la funzione di Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Chrnb2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Chrnb2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Chrnb2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Chrnb2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.