Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-416614-LAC

CHRNA7 codifica la subunità α7 del recettore nicotinico dell’acetilcolina (nAChR), un canale ionico omopentamerico attivato da ligando con elevata permeabilità al Ca²⁺, che collega la segnalazione colinergica a una rapida depolarizzazione di membrana e a cascati a valle di secondi messaggeri. Nei neuroni e nelle cellule gliali, l’attività dell’nAChR α7 influenza la plasticità sinaptica, il rilascio di neurotrasmettitori e vie Ca²⁺-dipendenti, incluse le vie di segnalazione MAPK/ERK e PI3K/AKT; in contesti immunitari ed epiteliali può invece modulare la produzione di citochine e l’eccitabilità cellulare. Un’espressione o una funzione deregolata di CHRNA7 è stata associata a fenotipi neuropsichiatrici e del neurosviluppo, inclusi endofenotipi correlati a schizofrenia ed epilessia, ed è stata indagata nel morbo di Alzheimer e nella biologia dell’infiammazione. In quanto recettore di superficie che integra il legame del ligando con la segnalazione intracellulare, CHRNA7 è spesso studiato in modelli di differenziazione neuronale, attività di rete e dinamiche del calcio evocate da stimolo.

Le particelle di attivazione lentivirale Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CHRNA7 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CHRNA7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 7/CHRNA7. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CHRNA7 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.