Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401880-ACT

CHRNA1 codifica la subunità α1 del recettore nicotinico dell’acetilcolina di tipo muscolare, un canale cationico regolato da ligando che avvia una rapida depolarizzazione alla giunzione neuromuscolare in risposta all’acetilcolina. Come parte del complesso recettoriale pentamerico, CHRNA1 contribuisce all’apertura/chiusura del canale (gating), alla selettività ionica e alla trasmissione sinaptica che collega l’attività del motoneurone alla contrazione del muscolo scheletrico. Questo recettore opera nelle vie di segnalazione colinergica e dell’accoppiamento eccitazione–contrazione, influenzando l’eccitabilità di membrana e i processi a valle dipendenti dal calcio. La disregolazione o le varianti patogene di CHRNA1 sono associate alle sindromi miasteniche congenite e ad altri difetti della trasmissione neuromuscolare, rendendolo rilevante per studi sulla biogenesi del recettore, il mantenimento sinaptico e le canalopatie.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CHRNA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CHRNA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CHRNA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CHRNA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 nelle cellule tumorali con espressione di CHRNA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.