Niban Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405758

Panoramica

FAM129A codifica Niban, una proteina citoplasmatica sensibile allo stress implicata nella regolazione della sopravvivenza cellulare e nell’adattamento a condizioni avverse come lo stress ossidativo e lo stress del reticolo endoplasmatico. Niban è stata associata alla modulazione dell’apoptosi e della segnalazione legata all’autofagia, ed è spesso studiata nel contesto degli output delle vie PI3K/AKT e MAPK, che influenzano la proliferazione e la tolleranza allo stress. Un’alterata espressione di FAM129A è stata riportata in molteplici tipi di tumore ed è utilizzata come indicatore molecolare della fitness delle cellule tumorali e dell’adattamento allo stress. Queste caratteristiche rendono Niban un bersaglio utile per analizzare le reti di segnalazione che collegano le risposte cellulari allo stress al controllo della crescita.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Niban (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FAM129A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FAM129A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FAM129A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Niban.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FAM129A per lo studio della segnalazione di Niban, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FAM129A critici per la funzione di Niban
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FAM129A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Niban CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Niban CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FAM129A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Niban Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Niban (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FAM129A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FAM129A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.