NFKBIA/IkB alpha Plasmide Double Nickase (h): sc-400034-NIC

NFKBIA codifica IκBα, un regolatore inibitorio fondamentale della segnalazione canonica di NF-κB, che si lega ai complessi RELA/p50 e li sequestra nel citoplasma finché la fosforilazione mediata da IKK non innesca l'ubiquitinazione e la degradazione proteasomiale. Attraverso questo meccanismo a feedback controllato, IκBα modula programmi trascrizionali dipendenti dallo stimolo che regolano infiammazione, immunità innata e adattativa, sopravvivenza cellulare e risposte allo stress. Un'attività o un'espressione deregolata di NFKBIA è stata associata all'attivazione aberrante della via di NF-κB osservata in numerosi disturbi immunomediati e in diversi contesti oncologici, nei quali la segnalazione alterata può influenzare le reti citochiniche, la resistenza all'apoptosi e la segnalazione del microambiente. In quanto nodo centrale nelle vie di TNF, IL-1, TLR e dei recettori dell'antigene, NFKBIA è frequentemente studiato per analizzare la dinamica di NF-κB, il feedback trascrizionale e il cross-talk tra vie di segnalazione.

NFKBIA/IkB alpha Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NFKBIA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NFKBIA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NFKBIA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NFKBIA interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.