NFATc1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400164

Panoramica

NFATC1 codifica NFATc1, un fattore di trascrizione regolato dal calcio/calcineurina che, in seguito alla segnalazione del recettore dei linfociti T, trasloca nel nucleo per coordinare i programmi di attivazione immunitaria. NFATc1 integra la segnalazione dipendente da Ca2+ con gli input di MAPK e AP-1 per controllare la trascrizione di citochine, molecole co-stimolatorie e geni associati alla differenziazione nei linfociti. Oltre all’immunità, NFATc1 contribuisce all’osteoclastogenesi e alle decisioni di destino cellulare attraverso il crosstalk con RANKL, NF-κB e altre reti trascrizionali. Un’attività disregolata di NFATc1 è stata associata a patobiologia infiammatoria e a stati trascrizionali aberranti osservati in molteplici contesti legati al cancro, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici dell’accoppiamento tra segnalazione e trascrizione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NFATc1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NFATC1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NFATC1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NFATC1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NFATc1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NFATC1 per lo studio della segnalazione di NFATc1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NFATC1 critici per la funzione di NFATc1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NFATC1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NFATc1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NFATc1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NFATC1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NFATc1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NFATc1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NFATC1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NFATC1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.