NF90 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402626-ACT

ILF3 codifica NF90, una proteina multifunzionale legante l’RNA a doppio filamento che regola l’espressione genica a livello trascrizionale e post-trascrizionale controllando la stabilità dell’mRNA, lo splicing, il trasporto e la traduzione. NF90 partecipa al processamento dell’RNA e a programmi di risposta allo stress, inclusi la segnalazione antivirale e la regolazione dei geni infiammatori, e può modulare la progressione del ciclo cellulare tramite interazioni con il macchinario trascrizionale e di maturazione dell’RNA. Attraverso questi ruoli, ILF3/NF90 influenza vie quali l’espressione dei geni stimolati dall’interferone, la sorveglianza dell’RNA e l’assemblaggio di complessi ribonucleoproteici. Un’attività deregolata di NF90 e un’alterata espressione di ILF3 sono state riportate in contesti rilevanti per la biologia del cancro, l’infiammazione mediata dal sistema immunitario e l’infezione virale, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico negli studi sulla regolazione genica.

NF90 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ILF3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NF90 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ILF3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ILF3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NF90. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ILF3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NF90 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NF90 nelle cellule tumorali con espressione di ILF3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.