Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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NF45 Double Nickase Plasmid (h): sc-402042-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NF45 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NF45 Double-Nickase-Plasmid (h) und NF45 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ILF2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NF45: sc-365283
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NF45 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402042-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NF45 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402042-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane ILF2 kodiert NF45, einen RNA- und DNA-bindenden Faktor, der mit ILF3/NF90 ein funktionelles Heterodimer bildet, um Transkription, RNA-Prozessierung, mRNA-Stabilität und Translation zu regulieren. NF45 ist an zellulären Stressantworten und immunassoziierten Genexpressionsprogrammen beteiligt; es wurden Rollen bei der Kontrolle der Zellzyklusprogression und bei der Aufrechterhaltung der Genomintegrität über seinen Einfluss auf den Nukleinsäurestoffwechsel beschrieben. Aufgrund dieser Aktivitäten wird ILF2/NF45 häufig in Signalwegen untersucht, die mit Proliferation und Apoptose verknüpft sind, und seine Fehlregulation wurde mit Tumorbiologie sowie veränderten Reaktionen auf genotoxischen Stress in Verbindung gebracht. NF45 wird außerdem im Kontext antiviraler und inflammatorischer Signalwege untersucht, in denen die posttranskriptionelle Kontrolle zytokinbezogener Transkripte wichtig ist.
NF45 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ILF2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ILF2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ILF2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ILF2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.