NF-L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421882

Panoramica

Nefl codifica la catena leggera dei neurofilamenti (neurofilament light polypeptide, NF-L), una proteina fondamentale dei filamenti intermedi che polimerizza con altre subunità dei neurofilamenti per costruire il citoscheletro assonale. NF-L sostiene il calibro dell’assone, la stabilità meccanica e il trasporto a lunga distanza organizzando reti di filamenti che interagiscono con il traffico dipendente da microtubuli e actina. L’assemblaggio dei neurofilamenti e la dinamica di fosforilazione contribuiscono alla maturazione e al mantenimento dei neuroni, collegando la funzione di Nefl alle vie che regolano il rimodellamento del citoscheletro e l’integrità assonale. L’alterazione dell’omeostasi dei neurofilamenti è ampiamente rilevante nella ricerca sulle malattie neurodegenerative e sul neurotrauma, dove cambiamenti nell’abbondanza e nell’organizzazione di NF-L riflettono stress e degenerazione assonale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NF-L (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nefl in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nefl insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nefl a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NF-L.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nefl per lo studio della segnalazione di NF-L, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nefl critici per la funzione di NF-L
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nefl per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NF-L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NF-L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nefl. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NF-L Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NF-L (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nefl per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nefl definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.