Neutrophil Elastase Plasmide Double Nickase (h): sc-400677-NIC

ELANE codifica l’elastasi dei neutrofili, una proteasi sierinica immagazzinata nei granuli azurofili che viene rilasciata durante la degranulazione e la formazione delle trappole extracellulari dei neutrofili (NET) per rimodellare la matrice extracellulare e degradare proteine microbiche. L’attività dell’elastasi neutrofila si intreccia con la segnalazione dell’immunità innata, l’equilibrio proteasi–antiproteasi e la proteolisi infiammatoria, influenzando la chemiotassi, il processamento delle citochine e le risposte di danno tissutale. Una funzione o un’espressione deregolata di ELANE è collegata a patologie infiammatorie guidate dai neutrofili e a una difesa dell’ospite compromessa, e varianti di ELANE sono associate a fenotipi di neutropenia congenita. Di conseguenza, ELANE è ampiamente studiato nella differenziazione mieloide, nella biogenesi dei granuli e nei meccanismi che collegano l’attivazione dei neutrofili a microambienti proteolitici.

Neutrophil Elastase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ELANE nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ELANE. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ELANE. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ELANE interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.