Neurogenin 2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419233-ACT

Neurog2 codifica Neurogenina 2, un fattore di trascrizione di tipo basic helix–loop–helix che funge da determinante proneurale durante lo sviluppo del sistema nervoso del topo. Promuove l’impegno verso la linea neuronale e i programmi di differenziamento regolando reti trascrizionali neurogeniche e interagendo con l’inibizione laterale mediata da Notch per bilanciare il mantenimento dei progenitori e la produzione di neuroni. Neurogenina 2 influenza anche la crescita dei neuriti, la migrazione e la specificazione dei sottotipi attraverso un controllo coordinato di geni a valle coinvolti nel rimodellamento del citoscheletro e nella maturazione sinaptica. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di NEUROG2 sono spesso studiate nel contesto di perturbazioni della regolazione genica dello sviluppo neurobiologico e di errata specificazione del destino di linea in modelli di progenitori neurali.

Neurogenin 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Neurog2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Neurogenin 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Neurog2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Neurog2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Neurogenin 2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Neurog2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Neurogenin 2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Neurogenin 2 nelle cellule tumorali con espressione di Neurog2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.